揭開(kāi)高保真DNA聚合酶的神秘面紗
更新時(shí)間：2018-06-22 點(diǎn)擊次數(shù)：1693
高保真DNA聚合酶*的擴(kuò)增能力，簡(jiǎn)單模板可擴(kuò)增20 kb，復(fù)雜模板可輕松擴(kuò)增10 kb。*的靈敏度，模板親和力強(qiáng)，極微量的模板也可擴(kuò)增。風(fēng)一樣的擴(kuò)增速度：延伸時(shí)間極短，擴(kuò)增速度可達(dá)15 sec/kb。廣泛的模板適應(yīng)性：適用于基因組DNA和cDNA等復(fù)雜模板的擴(kuò)增。通過(guò)定向改造，擁有高保真的特性，可以擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)15Kb的DNA片段，適用于超長(zhǎng)序列的擴(kuò)增，同時(shí)具有高靈敏度、高產(chǎn)量的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)“直接進(jìn)化”技術(shù)，定向改造了種類(lèi)十分豐富的適用于多種不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡纳锩福饔刑攸c(diǎn)，可以滿足不同的客戶需求，且Kapa的系列產(chǎn)品可以適用于市場(chǎng)上現(xiàn)有的各類(lèi)PCR/Real-time PCR儀器。
高保真DNA聚合酶的不同點(diǎn),作用底物不同,高保真DNA聚合酶底物是NTP高保真DNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。高保真DNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶沒(méi)有，當(dāng)需要解開(kāi)雙鏈的時(shí)候要解旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶的幫助。具有5‘到3’端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不僅有5‘到3’端的聚合酶活性，還具有3‘到5’端的外切酶活性。保證DNA復(fù)制時(shí)候校對(duì)，所以復(fù)制的忠實(shí)性高于轉(zhuǎn)錄的?？赡苁姑傅臉?gòu)象發(fā)生變化，促進(jìn)3'-OH與5'-PO4結(jié)合生成磷酸二酯鍵。若是錯(cuò)誤的核苷酸進(jìn)入結(jié)合位點(diǎn)，則不能與模板配對(duì)，無(wú)法改變酶的構(gòu)象而被3'-5'外切酶活性位點(diǎn)所識(shí)別并切除之。
高保真DNA聚合酶在PCR中扮演中至關(guān)重要的作用，從某種意義來(lái)講PCR技術(shù)就是耐熱聚合酶的技術(shù)。生物醫(yī)藥領(lǐng)域所使用的大部分是野生型的DNA 聚合酶，如大家熟悉的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶等天然形式存在的酶。因?yàn)槊阜肿幼陨淼慕Y(jié)構(gòu)和功能都有限制，隨著研究人員實(shí)驗(yàn)要求的提升和生物樣本復(fù)雜性的提高，野生型DNA聚合酶的局限性也逐漸凸顯出來(lái)，如擴(kuò)增效率低，特異性差，高AT或GC含量樣本擴(kuò)增結(jié)果差，樣本中或PCR 系統(tǒng)中有些抑制劑對(duì)反應(yīng)有干擾等等。
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