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細(xì)胞凍存是細(xì)胞生物學(xué)研究及藥物研發(fā)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中需要經(jīng)常面對(duì)的常規(guī)操作。隨著細(xì)胞越來(lái)越嬌，人工越來(lái)越貴，各種細(xì)胞凍存液應(yīng)運(yùn)而生，如何從名目繁多的細(xì)胞凍存液中選擇變成一個(gè)問(wèn)題。本文從細(xì)胞凍存液分類(lèi)，應(yīng)用場(chǎng)景，使用效果等多方面加以闡釋?zhuān)Ｍ軐?duì)如何選擇細(xì)胞凍存液有所助益。一、細(xì)胞凍存液的分類(lèi)從成分劃分（1）滲透性和非滲透性滲透性保護(hù)劑分子量小可滲透到細(xì)胞內(nèi)，如甘油、DMSO、乙二醇等，其在細(xì)胞冷凍存*凝固之前，滲入細(xì)胞內(nèi)，降低細(xì)胞內(nèi)外溶液中的電解質(zhì)濃度，阻止細(xì)胞內(nèi)水分外滲，避免細(xì)胞過(guò)...

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時(shí)凍...

分子生物學(xué)的發(fā)展使得大量致病基因被鑒定，科學(xué)家在這些研究成果的基礎(chǔ)上發(fā)展了基因治療。基因治療是利用基因載體將治療基因?qū)牖颊唧w內(nèi)，進(jìn)而表達(dá)功能蛋白以達(dá)到治療的目的。基因治療傳遞DNA面臨的挑戰(zhàn)之一是外源治療基因會(huì)被體液和胞外空間的核酸內(nèi)切酶降解。治療基因在目標(biāo)組織中的選擇性積累、細(xì)胞內(nèi)化以及從溶酶體逃逸這些問(wèn)題對(duì)所有核酸治療劑都是需要克服的。DNA必須輸送至細(xì)胞核以允許獲得轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。因此，設(shè)計(jì)和制備安全高效的基因載體來(lái)壓縮并且保護(hù)治療基因以免被核酸內(nèi)切酶降解并延長(zhǎng)其在體內(nèi)的...

DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。所以基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)最基本實(shí)驗(yàn)之一。今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來(lái)的時(shí)間了還會(huì)介紹動(dòng)物基因組DNA的提取步驟。DNA.RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達(dá)40g/L.DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中，DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細(xì)...

蛋白酶，顧名思義，降解蛋白的酶，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。在RNA提取中，蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶，防止RNA的降解。蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)，藥理學(xué)等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。一般儲(chǔ)存在-20°C，避光防潮密閉干燥蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類(lèi)的統(tǒng)稱蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶...

牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護(hù)或載體作用，不少酶類(lèi)添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對(duì)多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過(guò)1h時(shí)，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓Ｑ灏椎鞍椎姆磻?yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而B(niǎo)SA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...